余晓兰 张鹏
(北京化工大学生命科学与技术学院，北京100029)
【论著】
提要：为观察茶树油妇女洗液的抗菌作用，采用悬液定量试验方法对其最低抑菌浓度和杀菌效果进行了测定。结果，用茶树油妇女洗液原液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作用5min，杀灭率分别为100％ 和99．97％ ；对白色念珠菌作用lOmin，杀灭率99．20％ 。该洗液对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑制浓度分别为体积分数2％ 、10％和12．5％。菌悬液内含25％ 以上的小牛血清，对茶树油妇女洗液杀灭白色念珠菌的效果有轻度影响，随有机物含量增加影响更为明显。结论，茶树油妇女洗液对细菌繁殖体和真菌均具有明显的杀菌和抑菌作用，但其受有机物影响明显。
关键词茶树油；最小抑菌浓度；杀菌作用；白色念珠菌
中图分类号：R187 文献标识码：A
STUDY 0N ANTD棚ICR0BIC PR0PERTY 0F TEA TREE 0Ⅱ W O IAN LoT10N
YU Xiao—lan，ZHANG Pe(School of Life Science and Technology．，Beijing Chemical Engineering University，Beijing 100029，China)Abstract In order to observe the antimierobie efect of tea tree oil woman lotionsuspensionquantitative test method Wasused to determine its minimal microbe—inhibiting concentration and germ icidal eficacy．Results：The killing rates ofStaph OCOCCU,S nⅡ Bt and Escherichia coli exposed to the stock solution of the tea tree oil woman lotion for 5 min were1O0％ and 99．97％ respectively an d that of Candida albicans exposed for 10 min was 99．20％ ．The minimal inhibition
concentrations of the lotion for Candida albicans，StaphylOCOCCll3 a1．1,reu~and Escherichia coli were2％ ，10％ and 12．5％(v／v)respectively．Over 25％ of calf serum in the f~nSal suspension slightlyinfluenced the eficacy of the tea tree oilwoman lotion in kiling Candida albicans and the influence increased with increasing the organic substance content．Conclu—
sions：The tea tree oil woman lotion has significant germicidal and inhibiting efects of both vegetative form s of bacteria andfungi．but its efe~ts were influenced siginificantly by organic substance．
Key words tea tree oil；minimal inhibition concentration；germicidal E ；Candida albican~~
茶树油(Tea Tree Oil，TTO)是一种桃金娘白干层属植物(茶树)经萃取得到的生物活性精油。茶树油主要抗菌成分为萜烯一4醇与其它成分协同或者单独作用，具有广谱抗菌作用⋯。用茶树油为主要抗菌成分辅以大豆异黄酮及维生素E制成妇女洗液，含茶树油体积分数1％ ，呈黄色液体，皮肤渗透性好、刺激性小。为观察该洗液的杀菌效果和
抑菌作用，在实验室对其进行了试验研究。现将结果报告如下。
1 方法
1．1试验茵悬液制备
[作者简介] 余晓兰(1981一)，女，福建漳州市人。硕士研究牛。现主要从事人居环境有害化学成分研究。用金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(ATCC 10231)24 h新鲜培养物，用稀释液配制成试验菌悬液，再与30 L小牛
血清白蛋白溶液作对倍稀释，制备成符合实验要求的菌悬液。
1．2最小抑茵浓度测定
采用琼脂扩散法，将茶树油妇女洗液的系列稀释液与营养琼脂培养基混合均匀，再接种2 l含菌量约为10 cfu／ml的菌悬液；同时在不含茶树油妇女洗液的营养琼脂培养基内接种细菌作阳性对照。待培养基凝固后将其置于37~C恒温培养箱内培养24 h，观察结果。以无菌生长的最低浓度，判定为茶树汕妇女洗液最小抑菌浓度(MIC)。
1．3悬液定量杀菌试验
1．3．1中和剂鉴定实验在中和剂初步筛选的基础
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中国消毒学杂志2006年第23卷第3期上，进行中和剂鉴定试验。用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌为代表菌株，设计6组试验，按悬液定量杀菌试验程序进行试验。
鉴定试验设6组：①洗液+菌悬液；②(洗液+菌悬液)+中和剂；③ 中和剂+菌悬液；④(洗液+中和剂)+菌液；⑤稀释液+菌悬液培养；⑥稀释液+ 中和剂+培养基。试验结果中，当⑥组不长菌，③④⑤组菌量在1．0 X 10 一1．0×10 efu／ml之间且组间菌量误差率不超过15％，②组有菌生长，①组不长菌或者菌量远少于②组，表明所选中和剂及其使用浓度适宜。试验重复3次。
1．3．2杀菌试验将茶树油妇女洗液与试验菌悬液置于20cc水浴中恒温。在无菌试管内加入1 ml试验菌悬液与4ml该洗液，混合均匀，置于恒温水中作用至规定时间。取出0．5 ml样液加入到含4．5 ml中和剂试管内混合，中和作用10 min。取样进行活菌计数，同时作阳性对照。计算平均杀灭率。所有试验至少重复3次。
有机物影响试验是在菌悬液内加入不同浓度的小牛血清，按悬液定量杀菌试验，观察对茶树油妇女洗液杀灭上述3种试验菌效果的影响。
2 结果
2．1最小抑菌浓度试验结果
试验结果表明，茶树油妇女洗液对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑制浓度分别为体积分数2％ 、10％和12．5％(表1)。
表1 茶树油妇女洗液最小抑菌浓度试验结果
试验菌 MIC(％)
白色念珠菌
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
2．O
l2．5
lO O
2．2中和荆鉴定试验结果
结果表明，20 g／L吐温80，10g／L硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲液作为中和剂，可有效中和该洗液原液对试验菌残留作用，其中和产物对试验菌及其培养基无影响(表2)。
2．3杀菌试验结果
结果证明，用茶树油妇女洗液原液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作用5 min，杀灭率分别为100％和99．97％ ，对大肠杆菌作用10 rain杀灭率亦可达到100％ ；对白色念珠菌作用10 rain，杀灭率为99．20％(表3)。
表2 中和剂鉴定试验结果
不同试验菌回收菌数(efu／m1)
组别— —
大肠杆菌 金黄色葡萄球 白色念珠菌
试验菌
洗液
浓度(％ )
阳性 作用不同时问(reX．)
对照菌数 平均杀灭率(％)(efu／m1) 5 10
2．4有机物影响试验结果
有机物影响试验结果证明，菌悬内加入25％ 以牛血清对茶树油妇女洗液杀灭白色念珠菌的效果有影响，但对杀灭金黄色葡萄球菌的效果影响不明显(表4)。
表4 有机物对茶树油妇女洗液杀菌效果影响试验结果
有机物含鼍 对照菌数作用不同时间(mln)的平均杀灭率(％)(％ ) (cfu／m1) 5 10
3讨论
关于用植物提取物作为抗菌消毒制剂的研究报道很多 ．3】，但有关茶树油抗菌效果的研究鲜见报道。研究分析表明，茶树油主要抗菌成分萜烯一4一醇以及其它挥发油类，制剂比较容易，用其配制而成的洗液呈淡黄色溶液，无刺激性、无不良气味。试验结果表明，以其原液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌繁殖体具有很好的杀灭作用，但对白色念珠菌杀灭效果稍差。抑菌试验结果发现，茶树油洗液对白色念珠菌抑菌效果比较强，其最小抑菌浓度为体积分数2％ ，比对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌最小抑菌浓度低5倍以上。这对于妇女洗液意义重大，因为白色念珠菌等真菌类污染对于妇科威胁最明显。茶树油对细菌繁殖体与真菌的杀灭作用和抑制作用相反Hj]，其机理还有待于进一步研究。
实验发现，茶树油杀灭金黄色葡萄球菌和大肠杆菌受有机物影响不明显，50％小牛血清基本不影响杀灭效果；但有机物对茶树油杀灭白色念珠菌效果影响比较明显，在使用中应引起注意。作为妇女抗菌洗液不仅对常见致病菌有一定消毒效果，同时还应考虑对皮肤黏膜养护问题，因此在本洗液内加入了维生素E及天然植物雌激素大豆异黄酮，以满足女性的滋养护理需求，但这些成分已经试验确定不影响该洗液其它性能。
参考文献
[1] 王懿，王振维．茶树油抗菌活性的试验研究[J]．医药导报
